PDA 培养基配方 标准配制与灭菌要点

PDA 培养基全称马铃薯葡萄糖琼脂培养基，是真菌培养最通用的基础培养基，主要用来培养霉菌、酵母菌等真菌，经典标准配方以马铃薯、葡萄糖、琼脂三种核心原料为主，pH 一般自然偏酸，不需要额外调 pH，它营养温和广谱，微生物实验、植物病原真菌分离培养最常用，配制核心要点是马铃薯要煮出浸出液，琼脂作为凝固剂，葡萄糖提供碳源，配制完成之后必须高压蒸汽灭菌，否则容易杂菌污染。

经典 PDA 培养基配方（1000mL 也就是 1 升）

备注：如果是液体 PDA，去掉琼脂，其他原料不变，用于摇瓶真菌培养。

详细配制操作步骤

第一步 马铃薯去皮，切成小块或者薄片，称取 200g，加入适量蒸馏水煮沸

第二步 小火保持微沸 20 到 30 分钟，直到马铃薯块可以轻松被玻璃棒戳烂

第三步 用四层纱布过滤，只保留马铃薯浸出液，弃掉马铃薯残渣

第四步 往滤液里面加入 20g 葡萄糖，搅拌完全溶解

第五步 加入琼脂，继续加热搅拌，防止琼脂糊底，直到琼脂全部融化

第六步 补充蒸馏水，最终定容到 1000mL

第七步 分装到三角瓶或者试管，封口包扎

第八步 高压蒸汽灭菌，条件是 121 摄氏度，保持 20 分钟

第九步 灭菌结束之后取出，趁热倒平板，冷却凝固之后就可以使用

常用改良版本清单

1 加氯霉素 PDA：灭菌之后降温到 50 摄氏度左右，加入过滤除菌氯霉素，抑制细菌生长，只分离真菌

2 加链霉素 PDA：原理同上，抑制杂菌细菌污染

3 低葡萄糖 PDA：葡萄糖减量，适合部分需要抑制菌丝过快生长的菌株

配制注意事项

1 琼脂用量根据环境温度调整，气温高可以加到 20g，凝固效果更好

2 加热融化琼脂一定要不停搅拌，底部很容易焦糊，焦糊会影响 PDA 培养基品质

3 灭菌之后不要长时间高温放置，琼脂容易变色，营养成分破坏

4 倒平板的时候温度控制在 45 到 50 摄氏度，温度太高冷凝水多，温度太低琼脂提前凝固

5 配制好的 PDA 平板建议冷藏保存，一周内用完，避免干裂污染

【常见问题】

问题 1 PDA 培养基配方为什么要加琼脂

回答 1 PDA 培养基配方里面琼脂是凝固剂，让培养基冷却之后凝固成固体平板，液体 PDA 培养基配方不需要添加琼脂

问题 2 PDA 培养基配方 pH 需要调整吗

回答 1 经典 PDA 培养基配方一般是自然 pH，大约 5.6 到 6.0，适合真菌生长，常规实验不需要特意调整 PDA 培养基配方 pH

问题 3 PDA 培养基配方可以用蔗糖代替葡萄糖吗

回答 1 PDA 培养基配方可以临时用蔗糖替代葡萄糖，但是真菌生长状态会有差别，标准实验优先使用葡萄糖的 PDA 培养基配方

问题 4 PDA 培养基配方灭菌温度时间是多少

回答 1 标准 PDA 培养基配方配制之后，采用 121 摄氏度高压蒸汽灭菌 20 分钟，这是 PDA 培养基配方常规灭菌参数

【免责申明】

本文属于微生物实验基础科普，不同实验菌株需求会有改良配方，涉及病原微生物操作需要在合规生物安全实验室进行，严格遵守生物安全规范。